PCR anidada
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de biología molecular que se utiliza para amplificar y detectar pequeñas cantidades de ADN en una muestra compleja por ello se considera como una de las herramientas más útiles en la investigación científica y en la medicina. La PCR se basa en la copia de ADN mediante una polimerasa y cambios en la temperatura para permitir amplificar cualquier muestra de ADN conocido. La PCR anidada es una variante de la PCR convencional diseñada específicamente para amplificar, y así poder analizar, secuencias de ADN que se encuentran en cantidades especialmente bajas dentro de una muestra compleja de ADN.
En un termociclador se llevan a cabo tanto las PCR convencionales como las anidadas, cambiando el programa de temperaturas y tiempos
La PCR anidada se utiliza cuando se necesita detectar una secuencia específica de ADN en una muestra que contiene muchas otras secuencias de ADN. Por ejemplo, si se está buscando una mutación genética concreta en una muestra de tejido, la PCR anidada puede amplificar selectivamente la secuencia mutada para su posterior análisis.
La técnica se lleva a cabo en dos etapas. En la primera etapa, se realiza una PCR convencional utilizando dos cebadores (primers) que se unen a los extremos del ADN objetivo y amplifican la secuencia deseada de forma convencional. En la segunda etapa, se utiliza un segundo par de cebadores que se unirán dentro de la secuencia amplificada en la primera etapa. De esta manera se crea un producto de PCR más pequeño y específico (porque ha sido reconocido por dos pares de primers) que, gracias a la amplificación de la PCR anidada se puede detectar con mayor sensibilidad, por encima de otras secuencias muy similares que podrían estar en la muestra.
La PCR anidada tiene varias ventajas sobre otras técnicas de detección de ADN, como la hibridación in situ o la secuenciación directa. Es más sensible y específica que estas técnicas, lo que significa que puede detectar pequeñas cantidades de ADN y evitar la detección de secuencias no deseadas que tengan una secuencia altamente parecida. Además, la PCR anidada es más rápida y menos costosa que la secuenciación directa.
La PCR anidada se utiliza en una amplia variedad de aplicaciones, incluyendo la detección de enfermedades infecciosas, la identificación de mutaciones genéticas y la investigación forense. En la medicina, la técnica se utiliza para detectar virus como el VIH y el virus del papiloma humano (VPH), así como para identificar mutaciones genéticas que pueden estar relacionadas con enfermedades como el cáncer. En la investigación forense, la PCR anidada se utiliza para identificar muestras de ADN en escenas del crimen y para establecer vínculos genéticos entre sospechosos y víctimas. También se utiliza en la arqueología para extraer y amplificar ADN antiguo de fósiles y restos humanos.
En resumen, la PCR anidada es una técnica poderosa y versátil que se utiliza para amplificar y detectar secuencias específicas de ADN en una muestra. La técnica se utiliza en una amplia variedad de aplicaciones en la investigación científica y en la medicina, y es más sensible y específica que otras técnicas de detección de ADN. La PCR anidada ha sido fundamental en muchos avances científicos y ha contribuido significativamente a nuestra comprensión de la genética y la biología molecular.