Métodos de estudio de la célula (II)
Tipos de microscopios ópticos.
Cuando hablamos de microscopio óptico hoy día nos referimos al microscopio compuesto donde se combinan dos lentes o sistemas de lentes convergentes, colocados en los extremos del tubo (obetivo, situado más cerca del objeto y el ocular, más cercano al ojo del observador).
Además podemos considerar las siguientes variantes de utilidad en biología:
-
Estereomicroscopios: dos objetivos y dos oculares que permiten visualizar imágenes en tres dimensiones.
-
De Luz Ultravioleta. Con mayor poder de resolución
-
De Fluorescencia. Su uso principal es el de detectar reacciones inmunológicas, pues utilizamos anticuerpos o sustancias con capacidad de emitir fluorescencia, para distinguir diferentes zonas en la muestra.
-
De Contraste de Fases. Se utilizan espacialmente en examen de preparaciones de organismos vivos, donde no se quieren utilizar colorantes.
-
De Campo Oscuro. El efecto que generan es de de ver los objetos muestra intensamente iluminados sobre un fondo negro.
-
Invertidos: los objetivos se sitúan debajo de la muestra y un juego de prismas posibilita la visión de forma cómoda por parte del observador. Se utilizan para ver muestras situadas en un medio líquido,por ejemplo dentro de una placa de petri.
El microscopio electrónico
El microscopio electrónico de transmisión utiliza electrones en lugar de rayos de luz, y electroimanes en vez de lentes. Cuando los electrones pasan a través de la preparación algunos son difractados, formándose una imagen que se hace visible en una pantalla sensible a los electrones.
El primer microscopio electrónico fue diseñado por Ernst Ruska, Max Knoll y Jhener entre 1925 y 1930 quiénes se basaron en los estudios de Louis-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de los electrones.
La longitud de onda de la radiación de electrones es mucho más pequeña que la de la luz visible, lo que aumenta el poder de resolución, que resulta ser unas 400 veces superior al del microscopio óptico. Con el electrónico es posible ver muchas partículas incluso de tamaño molecular. De hecho podríamos aumentar un objeto hasta ¡dos millónes de veces!
En todo caso la limitación vuelve a ser el poder de resolución, con lo que ordinariamente en biología utilizamos unos 100.000 aumentos.
Inconvenientes de los microscopios electrónicos de transmisión:
-
En microscopía electrónica las muestras deben ser muy finas y han de estar colocadas en el vacío. Esto hizo necesario el desarrollo de nuevas técnicas de inclusión, corte y tinción del material estudiado.
-
El vacío, que debe establecerse para que pueda llevarse a cabo el desplazamiento de los electrones, impide el empleo del microscopio electrónico de transmisión para el estudio de células vivas.
-
Las secciones ultrafinas necesarias para la observación al microscopio electrónico de transmisión no permiten apreciar la disposición tridimensional de los componentes celulares.
Microscopio electrónico de barrido.
Un sistema sencillo que permite obtener una imagen tridimensional es el microscopio electrónico de barrido. Mientras que el de transmisión utiliza los electrones que han atravesado la muestra, el de barrido utiliza los electrones dispersados o emitidos a partir de la superficie de la muestra. Ésta se fija, se seca y se recubre con una capa delgada de un metal pesado. Después la muestra es barrida por un haz de electrones. Los electrones procedentes del metal de la muestra son detectados sobre una pantalla de televisión, donde forman una imagen que posee puntos brillantes y sombras, lo que le confiere un aspecto tridimensional.
Fue inventado en 1931 por Ernst Ruska.
Su resolución varía entre 3 y 20 nanómetros, dependiendo del tipo de tecnología utilizada. Por lo tanto no nos permite grandes aumentos, pero a cambio consigue la visión de imágenes tridimensionales, con perspectiva de indudable belleza y utilidad para el estudio científico.
-
