TRIzol

Trizol es el nombre comercial del reactivo TRI, comercializado por la casa Invitrogen. Si bien se puede fabricar de forma “casera” en el laboratorio, Trizol es el nombre genérico que se da comúnmente a estos productos con las mismas cualidades que el de la casa Invitrogen. Es el principal agente que se emplea durante las extracciones principalmente de ARN, aunque también se pueden obtener el ADN y las proteínas con pequeñas variaciones del protocolo. El Trizol funciona tanto para tejidos animales, como para vegetales, por lo que, como se ve, es muy útil y común en un laboratorio de biología molecular.

Además de su uso en la extracción de ARN, ADN y proteínas, el Trizol también se utiliza en la purificación de ácidos nucleicos. Este proceso es esencial para eliminar cualquier contaminante que pueda interferir con los experimentos posteriores. El Trizol es capaz de romper las células y liberar los ácidos nucleicos, que luego se pueden separar de las proteínas y otros componentes celulares mediante centrifugación.

Fue descrito por Piotr Chomczynski y Sacchi, N. en 1987, en la revista Analytic Biochemistry en su número 162. Aunque Analitic Biochemistry es una revista de 3.2 de impacto (bastante buena), no tiene nada que ver con el Nature o el Science que rondan los 30 (aunque ambas son una liga aparte). Es curioso puesto que el protocolo de extracción de ARN, ADN o proteínas debe ser de los más citados del mundo y sin embargo no atrajo la atención de ninguna de las grandes revistas.

Componentes: los principios activos del Trizol son principalmente fenol (un compuesto volátil tóxico) hidroxiquinoleína, que es un inhibidor de ARNasas, tiocianato de guanidina, tiocianato de aminio y glicerol. De hecho el nombre correcto del protocolo del trizol- cloroformo es método del tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo.

Además de estos componentes, el Trizol también contiene bromuro de etidio, un agente intercalante que se utiliza para teñir el ADN y el ARN para su visualización bajo luz ultravioleta. Este componente también es altamente tóxico y debe ser manejado con cuidado.

Conservación: El TRIzol es sensible a la luz por lo que se recomienda guardarlo en un recipiente no transparente y muchas veces se aconseja que se envuelva en papel de aluminio para más seguridad. Igualmente al contener compuestos volátiles como el fenol se recomienda mantenerlo a temperatura por debajo de la temperatura ambiente, para evitar su evaporación.

Descripción del reactivo: El Trizol es un líquido rosa brillante o rosa translucido. El olor del fenol es extremadamente fuerte. El TRIzol mantiene la integridad de los ácidos nucleicos durante la homogeneización del tejido. Además rompe células y componentes celulares. La homogenización del tejido tiene que hacerse en frio para evitar la degradación del ADN o el ARN, pero una vez añadido el Trizol su degradación se ve seriamente reducida.

Durante la preparación de TRIzol casero se añade agua doble-destilada para saturar y se deja reposar overnigth (una noche).

Precauciones y Consejos de uso: antes de empezar a usar este producto es muy recomendable leerse sus instrucciones de uso y que hacer en caso de emergencia. Al utilizar TRIzol debe procederse con precaución. Este reactivo está etiquetado como muy corrosivo, irritante y puede causar la muerte. El fenol es muy corrosivo (puede quemar una falda en unos minutos) y además sus vapores pueden causar irritación en la piel con una exposición leve (una gotita), perdida de sensibilidad, quemaduras en la mucosa que no se recuperará y exposiciones excesivas pueden causar paro respiratorio y muerte, esto es debido principalmente al fenol. Aunque durante el protocolo también se emplea cloroformo, por lo que es importante trabajar en una cabina de flujo laminar mientras se usen ambos compuestos. Evitando así desmayarse encima del fenol.

En caso de exposición, se cae el bote encima o salpicadura grave, es mejor intentar quitar lo más rápido posible la ropa que ha sido expuesta, antes de que llegue a la piel. En el caso de contacto directo el protocolo de emergencia sugiere lavar con abundante agua corriente.

Además de estas precauciones, es importante recordar que el Trizol es un reactivo químico y, como tal, debe ser manejado con cuidado. Siempre debe ser utilizado en un área bien ventilada y con equipo de protección adecuado, incluyendo guantes y gafas de seguridad. También es aconsejable tener a mano un kit de primeros auxilios para tratar cualquier posible exposición accidental.